蛋白組學(xué)分析，是蛋白質(zhì)分析的一項(xiàng)非常重要的技術(shù)，一般會(huì)使用ESI-LCMS或者M(jìn)ALDI-TOFMS。許多蛋白質(zhì)和肽極其微量，需要質(zhì)譜儀的高靈敏度檢測(cè)才能發(fā)現(xiàn)，而這就需要一個(gè)非常穩(wěn)定的前端HPLC支持此微量檢測(cè)。
Prominence nano系列是一套納升LC系統(tǒng)，可在納升流量下進(jìn)行精準(zhǔn)流速的溶劑輸送。按照應(yīng)用不同，可以配置成1D和2D系統(tǒng)。
Prominence nano具備納升流速下的高保留時(shí)間重復(fù)性，非常低的系統(tǒng)死體積和極低的交叉污染等特點(diǎn)。
基本性能
· 納升流速傳感器可保證精確的納升溶劑傳輸
· RFC系統(tǒng)大大降低溶劑消耗
· 低容量納升閥---保證了低的系統(tǒng)死體積
· 高靈敏度分析
納米輔助控制軟件的直觀操作
· 圖形界面直觀操作
· 可視化監(jiān)控儀器運(yùn)行狀態(tài)
· 二維參數(shù)的便捷設(shè)置
蛋白質(zhì)組分析的應(yīng)用
· 高保留時(shí)間重復(fù)性
· 二維LC的高分辨率
納升流速傳感器可保證精確的納升溶劑傳輸
LC-20AD nano采用了新的RFC技術(shù),可對(duì)每一個(gè)泵進(jìn)行獨(dú)立的流速控制，在納升流速下保證好的流量精度。專(zhuān)利的RFC系統(tǒng)是由高精度的納升流速感應(yīng)器控制，確保在任何時(shí)間精準(zhǔn)的流速測(cè)量。同時(shí)，流量傳感器配置了精確的溫度控制機(jī)制，以最大程度減少不確定的環(huán)境因素對(duì)溶劑輸送的影響。LC-20AD nano在梯度分析能保證很好的流速穩(wěn)定性，在300nL/min時(shí)候保留時(shí)間重復(fù)性的RSD小于0.2%。
RFC系統(tǒng)的原理
泵內(nèi)配置了一個(gè)流速傳感器，可持續(xù)監(jiān)測(cè)泵輸出的納升流速。為了保證流速在設(shè)定的范圍內(nèi)，輸液泵采用反饋控制模式，傳感器的監(jiān)測(cè)到真實(shí)流速后可以自動(dòng)調(diào)整分流比例，從而保證流速的準(zhǔn)確性。另外，分流后的流動(dòng)相在混合前就經(jīng)過(guò)回流管路回到溶劑瓶，不會(huì)浪費(fèi)溶液。
低溶劑消耗
RFC系統(tǒng)可確保每個(gè)泵輸出的溶劑分流后又回到流動(dòng)相瓶中。就算在高壓梯度分析中，兩種溶劑在分離后并不會(huì)像廢棄物一樣排出，從而降低溶劑消耗并減少對(duì)環(huán)境的影響。
FCV納升閥，低死體積
FCV nanoFCV納升閥體積為25nL，在納升范圍內(nèi)幾乎不會(huì)展寬。在納升LC使用捕集柱進(jìn)樣和二維系統(tǒng)中，F(xiàn)CV 納升閥是不可或缺的。FCV 納升閥通過(guò)使用強(qiáng)化的定子和聚醚醚酮的轉(zhuǎn)子，可以大大降低樣品的吸附，同時(shí)獲得很好的耐用性。
高靈敏度分析
SIL-20ACSIL-20AC的直接進(jìn)樣功能與FCV納升閥的低擴(kuò)射性能相結(jié)合可實(shí)現(xiàn)微量體積樣品的進(jìn)樣分析。FCV納升閥后連接的捕集柱可以對(duì)進(jìn)樣的樣品進(jìn)行捕集濃縮，從而實(shí)現(xiàn)高靈敏度分析。而且，SIL-20AC被公認(rèn)為交叉污染最低的自動(dòng)進(jìn)樣器，這些特征都可以滿(mǎn)足高靈敏度MS分析的要求。
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2維LC的輔助控制軟件
輔助控制軟件可對(duì)2維LC進(jìn)行便捷設(shè)置，在軟件圖形界面上可輕松對(duì)2維HPLC的進(jìn)行復(fù)雜梯度編程，設(shè)定流速等，然后生成方法文件并下載至儀器中進(jìn)行控制，而圖形化的流路圖和梯度曲線代表當(dāng)前狀態(tài)。簡(jiǎn)便的設(shè)置可避免單獨(dú)使用LC控制軟件帶來(lái)的一系列的操作問(wèn)題。
Prominence nano 2D系統(tǒng)在線的結(jié)合了離子交換和反向色譜模式（如下圖所示），每種色譜模式都獨(dú)立運(yùn)行，兩種模式的結(jié)合可進(jìn)行最有效的分離。Prominence nano 2D系統(tǒng)可與配備N(xiāo)ano ESI源的LCMS系統(tǒng)聯(lián)用進(jìn)行濕法蛋白組學(xué)分析，也可以與點(diǎn)靶儀和MALDI-TOF質(zhì)譜聯(lián)用進(jìn)行干法蛋白組學(xué)分析。
易操作的一維體系
Nano-Assist一維LC設(shè)置圖1D 納升LC系統(tǒng)對(duì)于確認(rèn)SDS PAGE分離前的蛋白質(zhì)十分有效，1D系統(tǒng)只需要非常簡(jiǎn)單的操作就可以實(shí)現(xiàn)。當(dāng)然，輔助控制軟件在1D和2D系統(tǒng)中使用都是十分方便的。
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高保留時(shí)間重復(fù)性
蛋白質(zhì)組分析需要比較不同樣本的色譜峰差異，而樣本中又存在許多特征相似的多肽，對(duì)保留時(shí)間的重復(fù)性要求非常高。Prominence nano系統(tǒng)的高重復(fù)性可保證蛋白質(zhì)組分析的高精數(shù)據(jù)，配置了RFC系統(tǒng)的LC-20AD nano可以在流速為300 nL/min獲得RSD不超過(guò)0.2% 的保留時(shí)間重復(fù)性。
牛血清白蛋白（BSA）酶解樣品的重復(fù)性
2維 LC的高分辨率
牛血清白蛋白（BSA）酶解樣品的重復(fù)性在蛋白質(zhì)組學(xué)分析時(shí)，單一的1D反相分離不足以提供足夠的色譜峰容量；所以，為了實(shí)現(xiàn)復(fù)雜樣品的分離，需要進(jìn)行2D分離以保證足夠的峰容量。Prominence nano系統(tǒng)可以進(jìn)行2D分析，結(jié)合陽(yáng)離子交換和反相模式，為蛋白質(zhì)組學(xué)分析提供所需的核心技術(shù)。下圖為200fmol酵母蛋白質(zhì)的分析圖，1D分離中的未分離組分在2D中繼續(xù)分離成幾個(gè)組分，2D分離的峰容量大大大于1D所獲得的效果。
分析條件
一維
柱 | PolysulfoethylA (50mmL.×1mmI.D.) |
流動(dòng)相 | 甲酸銨緩沖液
濃度STEP梯度 |
流速 | ?40 nL/min |
捕集柱 | (5 mmL.×300 ?m I.D.)
L-column （micro） |
捕集時(shí)長(zhǎng) | 5分鐘 |
脫鹽溶劑 | 水/蟻酸=100/0.1 |
脫鹽流速 | L/min |
脫鹽時(shí)長(zhǎng) | 5分鐘 |
2維
柱 | PicoFrit (100 mmL.×75 ?m I.D.) |
流動(dòng)相 | 梯度洗脫
A)水/乙腈/蟻酸=98/2/0.1(v/v)? B) 水/乙腈/蟻酸=5/95/0.1(v/v) |
流速 | 600nL/min |
溫度 | 溫度 |
檢測(cè) | LCMS-IT-TOF |
樣本 | 酵母蛋白中的蛋白
（相當(dāng)于200 fmol的） |
* 分別利用1維和2維中不同類(lèi)型的柱體進(jìn)行其他組合的分離模式也是可行的。在這種情況下，分離或檢測(cè)方法由于使用的移動(dòng)相分離模式或類(lèi)型之間的相互作用，可能會(huì)有一些限制。
連接MALDI-TOFMS使用
Prominence nano系統(tǒng)不僅僅可以通過(guò)nano ESI接口連接LCMS使用，還可連接到配有自動(dòng)點(diǎn)靶儀的MALDI-TOFMS儀器。為了準(zhǔn)確分析MALDI靶的每個(gè)色譜峰，需要LC能夠在1nL到1μL范圍之內(nèi)精確控制流速，Prominence nano系統(tǒng)的完全滿(mǎn)足了此需要。
酶解BSA樣品的UV色譜圖（500fmol）
分析條件
檢測(cè)器 | UV220 nm |
柱 | MonoCap for Fast-flow 快速M(fèi)onoCap
?(250 mmL. × 100 μm I.D.) |
流動(dòng)相 | 1、水/乙腈/蟻酸=98/2/0.1(v/v)? B) 水/乙腈/蟻酸=5/95/0.1(v/v)
2、梯度洗脫 |
流速 | 1 μL/min |
溫度 | 環(huán)境溫度 |
捕捉柱 | ODS (1 mmL. × 0.5 mm I.D.) |
點(diǎn)靶間隔 | 12 秒的點(diǎn)斷
每點(diǎn)液體：200nL（不包括基質(zhì)） |