2019年3月1日,美國食品和藥物管理局(FDA)在官網(wǎng)發(fā)布血管緊張素II受體阻滯劑(ARBs)藥物氯沙坦的自愿召回公告,涉及到印度Hetero Labs Ltd.生產(chǎn)的87批氯沙坦鉀片,而導(dǎo)致該召回的主要原因是發(fā)現(xiàn)其中含有N-亞硝基-N-甲基-4-氨基丁酸(NMBA)雜質(zhì)。由于NMBA是已知動物和潛在人類的致癌化學(xué)物質(zhì),是繼N?亞硝基二甲胺(NDMA)和N?亞硝基二乙胺(NDEA)之后上市ARBs藥物中檢測到的第三種亞硝胺類遺傳毒性雜質(zhì)。此后,F(xiàn)DA相繼公布了Teva Pharmaceuticals和Vivimed Life Sciences Pvt Ltd等制藥公司自愿召回涉及氯沙坦鉀的63批藥品,其原因為檢出含有NMBA。同時,加拿大衛(wèi)生部(HC)及英國衛(wèi)生部(DHSC)也在官網(wǎng)上發(fā)布了氯沙坦類藥物的召回公告。直至2019年6月12日,Teva Pharmaceuticals仍在擴(kuò)大自愿召回7批檢出NMBA氯沙坦鉀片,可見藥物中的遺傳毒性雜質(zhì)仍受到公眾及藥品監(jiān)管機(jī)構(gòu)的高度關(guān)注。
在FDA已公布的ARBs藥物亞硝胺雜質(zhì)限度表中,NMBA的日允許攝入量最大值為0.96ppm。 FDA評估了暴露于9.82ppm水平NMBA相比于終生暴露于0.96ppm NMBA的服藥水平,表明6個月的暴露量不會存在患癌風(fēng)險。
N-亞硝基-N-甲基-4-氨基丁酸(NMBA)
N-Nitroso-N-methyl-4-aminobutyricacid(NMBA)
CAS. 61445-55-4
因此,為了確?;颊咴诰彌_期可獲得氯沙坦類藥物,F(xiàn)DA不反對含NMBA低于9.82ppm的氯沙坦保持銷售。該過渡緩沖期FDA設(shè)為6個月,直至生產(chǎn)企業(yè)提供亞硝胺雜質(zhì)符合要求的氯沙坦藥物來填補(bǔ)市場。
目前,關(guān)于氯沙坦鉀中NMBA的檢測方法尚未見公開報道,為及時應(yīng)對市場檢測需求,島津中國率先推出了基于LC-MS/MS技術(shù)的檢測方法,該方法操作簡單,靈敏度高,適用性強(qiáng),可有效用于氯沙坦鉀中NMBA的分析檢測。
1.1 儀器:?LCMS-8050三重四極桿質(zhì)譜儀聯(lián)用儀,含有:LC-30AD×2輸液泵,DGU-20A5R在線脫氣機(jī),SIL-30AC自動進(jìn)樣器,CTO-30A柱溫箱,CBM-20A系統(tǒng)控制器,LCMS-8050三重四極桿質(zhì)譜儀,LabSolutions(Version 5.82 SP1)色譜工作站。
1.2 分析條件:
液相色譜條件
色 譜 柱 | :Shim-pack XR-ODS II 2.0 mm I.D.× 100 mm L., 2.2 μm | ||
流 動 相 | :A相-0.1%甲酸水溶液;B相-甲醇 | ||
流 速 | :0.3 mL/min | 柱溫 | :40℃ |
進(jìn)樣體積 | :2 μL | 洗脫方式 | :梯度洗脫 |
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質(zhì)譜條件
離子化模式 | :ESI,正離子檢測 | 碰撞氣 | :氬氣 270 kPa |
霧化氣流速 | :3.0 L/min | 加熱模塊溫度 | :400℃ |
加熱氣流速 | :10.0 L/min | 干燥氣流速 | :10.0 L/min |
接口溫度 | :300℃ | 掃描模式 | :多反應(yīng)監(jiān)測(MRM) |
DL溫度 | :250℃ | MRM參數(shù) | :見下表 |
?
1.3 標(biāo)準(zhǔn)品溶液:取NMBA標(biāo)準(zhǔn)貯備液,以純甲醇逐級稀釋為0.5、1、2、5、10、20、50、100 ng/mL的八個不同濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。
1.4 樣品溶液:取氯沙坦鉀三批原料藥(符合EP9.0)0.1 g于10 mL容量瓶中,加甲醇適量,超聲1 min至全部溶解,放冷至室溫,用甲醇定容待測。
2.1標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖
圖1. NMBA標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖(100 ng/mL)
(黑色-總離子流;粉色-MRM147.15/117.10;藍(lán)色-MRM147.15/87.10;棕色-MRM147.15/44.10)
2.2 線性關(guān)系及檢出定量限
圖2. NMBA標(biāo)準(zhǔn)曲線
檢出限(LOD)0.5 ng/mL(MRM147.15/117.10),定量限(LOQ)1.0 ng/mL (MRM147.15/117.10)
2.3 精密度實(shí)驗:10 ng/mL標(biāo)準(zhǔn)溶液為樣本連續(xù)進(jìn)樣,日內(nèi)及日間保留時間相對標(biāo)準(zhǔn)偏差低于0.1%,峰面積低于1.10%。
2.4 加標(biāo)回收實(shí)驗
取0.1 g氯沙坦鉀樣品于10 mL容量瓶中,加入NMBA標(biāo)準(zhǔn)品溶液(相當(dāng)于50、100、200 ng NMBA標(biāo)準(zhǔn)品),按照1.4中的方法進(jìn)行處理,上機(jī)分析。加標(biāo)的氯沙坦鉀溶液色譜圖(以200 ng加標(biāo)量為例)見圖3。三個平行樣品的低中高平均回收率分別為98.04%,94.40%,95.61%。
圖3 NMBA加標(biāo)量為200 ng時氯沙坦鉀溶液色譜圖
2.5 檢測結(jié)果:三批樣品中NMBA均低于最小檢出限(LOD)。
本工作建立了使用LCMS-8050三重四極桿質(zhì)譜聯(lián)用儀測定氯沙坦鉀原料藥中N-亞硝基-N-甲基-4-氨基丁酸(NMBA)雜質(zhì)的方法,在0.5~100 ng/mL濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好,檢出限和定量限分別為0.5 ng/mL和1.0 ng/mL。使用此方法對三批次氯沙坦鉀原料藥進(jìn)行了測定,結(jié)果為NMBA未檢出。本方法簡單、快速、靈敏、準(zhǔn)確,可有效用于氯沙坦鉀原料藥中NMBA的分析檢測。